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    生長激素生物測定法 中國藥典2020版四部通則1219

    中國藥典2020版四部通則1219

    生長激素生物測定法


           1.去垂體大鼠體重法

      本法系通過比較生長激素標準品(S)與供試品(T)對幼齡去垂體大鼠體重增加的程度,以測定供試品效價的一種方法。
      標準品溶液的制備    試驗當日,取標準品,按標示效價用含0.1%牛血清白蛋白的0.9%氯化鈉溶液,制成高、低兩種濃度的標準品溶液。一般高濃度標準品溶液配成每1ml含0.1~0.2IU,低濃度標準品溶液配成每1ml含0.025~0.05IU,高低兩濃度比值(r)一般為1∶0.25,標準品溶液分裝成每天劑量并密封于-15℃以下保存,臨用時融化。
      供試品溶液的制備    按供試品的標示效價或估計效價(AT),照標準品溶液的制備及保存方法制備和保存。
      測定法     取同一來源、品系,出生26~28天,體重60~80g,同一性別,健康的大鼠,試驗前2~3周手術摘除垂體,手術后于屏障環境飼養使其恢復。
      取去垂體手術后2~3周、體重變化小于手術前±10%的大鼠,按體重隨機等分成4組,每組至少8只,每只編號并記錄體重。分別自頸部皮下注射一種濃度的標準品溶液或供試品溶液0.5ml,每日1次,連續6日。于最后1次給藥后24小時,處死大鼠,稱體重,必要時實驗結束后可進行尸檢,切開蝶鞍區,肉眼檢查有無垂體殘留,剔除有垂體殘存的大鼠。每只動物給藥后體重增加的克數作為反應值。供試品與標準品各劑量組所致反應的平均值應相當。照生物檢定統計法(通則1431)中的量反應平行線測定法計算效價及實驗誤差。
      本法的可信限率(FL%)不得大于50%。
      2.去垂體大鼠脛骨法
      本法系通過比較生長激素標準品(S)與供試品(T)對去垂體大鼠脛骨骨骺板寬度增加的程度,以測定供試品效價的一種方法。
      標準品溶液和供試品溶液的制備    同體重法。
      測定法    本法可與去垂體大鼠體重法同步進行。待體重法實驗結束后,取下兩腿脛骨,置10%甲醛溶液保存,從脛骨近心端頂部中間沿矢狀面切開,置10%甲醛溶液中保存,水洗10分鐘后,置丙酮溶液中10分鐘,水洗3分鐘,置2%硝酸銀溶液中染色2分鐘,水洗后置水中強光照射至變棕黑色,于10%硫代硫酸鈉溶液固定30秒,置80%乙醇溶液中供測量用。測量時沿刨面切1mm左右薄片,置顯微鏡下測量脛骨骨骺板寬度,作為反應值。照生物檢定統計法(通則1431)中的量反應平行線測定法計算效價及實驗誤差。
      本法的可信限率(FL%)不得大于50%。


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