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    洋地黃生物測定法 中國藥典2020版四部通則1214

    中國藥典2020版四部通則1214

    洋地黃生物測定法

      本法系比較洋地黃標準品(S)與供試品(T)對鴿的最小致死量(U/kg),以測定供試品的效價。

      標準品溶液的制備    迅速精密稱取洋地黃標準品適量,避免吸潮,置玻璃容器內,按標示效價計算,每1單位精密加入76%乙醇1ml,密塞,連續振搖1小時,靜置片刻,用干燥濾器迅速濾過,防止乙醇揮發,濾液即為每1ml中含1單位的溶液,4~8℃貯存,經驗證保持活性符合要求的條件下,可在1個月內使用。

      標準品稀釋液的制備    試驗當日,精密量取標準品溶液適量,用0.9%氯化鈉溶液稀釋,稀釋液濃度(U/ml)應調節適當(一般可用1→30),使鴿的平均最小致死量為25~34ml。

      供試品溶液和稀釋液的制備    供試品如為粉末,精密稱取適量,按標示量或估計效價(AT),照標準品溶液及其稀釋液的制備法制備;供試品如為片劑,取20片以上,精密稱重,求出平均片重,迅速研細,再精密稱取不少于20片的粉末,按稱重及標示量(AT)計算,照標準品溶液及其稀釋液制備法制備。供試品稀釋液和標準品稀釋液的鴿平均最小致死量(ml)應相近。

      測定法    取健康合格的鴿,試驗前16~24小時禁食,但仍給予飲水,試驗前準確稱重,選取體重在250~400g的鴿(每次試驗所用鴿的體重相差不得超過100g),按體重隨機等分成兩組,每組至少6只,一組為標準品組,一組為供試品組,兩組間鴿的情況應盡可能相近。

      將鴿仰縛于適宜的固定板上,在一側翼靜脈處拔除羽毛少許,露出翼靜脈,插入與滴定管(精密度0.02ml)相連的注射針頭,緩緩注入標準品稀釋液或供試品稀釋液,開始時,一次注入0.5ml,然后以每分鐘0.2ml等速連續注入,至鴿中毒死亡立即停止注入。一般死亡前有強烈顫抖、惡心嘔吐、排便等現象發生,至瞳孔迅速放大、呼吸停止為終點。記錄注入稀釋液的總量(ml),換算成每1kg體重致死量(ml)中所含效價(U/kg),取其10倍量的對數值作為反應值,照生物檢定統計法(通則1431)中的直接測定法計算效價及實驗誤差。

      本法的可信限率(FL%)不得大于15%。


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